正就读中学的少年迈尔斯·莫拉莱斯，生活在大都市纽约的布鲁克林区。他聪明却有些叛逆，正处在寻找自我价值的青春期。一次意外，他被一只来自实验室的放射性蜘蛛咬伤，身体随之发生奇妙的变化，获得了隐身、放电等超能力。某夜，迈尔斯偶然目睹了蜘蛛侠与超级反派金并的激烈对决。金并试图利用超级对撞机打开平行宇宙的通道，蜘蛛侠为阻止阴谋而壮烈牺牲。然而，对撞机的能量释放撕裂了时空，来自其他宇宙的五位蜘蛛侠——彼得·帕克、格温·斯黛西、暗影蜘蛛侠、潘妮·帕克和蜘猪侠，意外被传送到了迈尔斯的世界。面对这些性格迥异、风格各异的蜘蛛侠前辈，迈尔斯起初手足无措。但在他们的指导下，他逐渐适应并掌握自己的超能力。与此同时，金并的阴谋仍在继续，若对撞机再次启动，整个多元宇宙都将面临崩塌的危险。迈尔斯必须鼓起勇气，承担起蜘蛛侠的使命，与伙伴们一同阻止金并，修复时空裂痕，拯救所有世界。